La nefropatía lúpica es una enfermedad inflamatoria que afecta al parénquima renal. Las citoquinas y las quimiocinas son los mediadores inmunológicos claves que se han relacionado con la patogénesis de la enfermedad1. La obtención de marcadores pronósticos no invasivos es un objetivo primordial para mejorar el manejo clínico de estos pacientes2. Se ha demostrado la presencia de quimiocinas en la orina de pacientes con la nefritis lúpica3,4. Los métodos multiplex actualmente disponibles permiten discernir simultáneamente una gran variedad de mediadores en una cantidad muy escasa de orina. La MCP-1 se considera marcador de inflamación renal, pero no es exclusivo de lupus. Se encuentra elevado en orina de pacientes con diabetes mellitus, nefropatía por IgA y ciertas vasculitis, entre otras condiciones.

En este estudio nosotros perfilaremos 17 moléculas en la orina, siendo la primera orina de la mañana, de 25 pacientes con lupus eritematoso sistémico (LES)12 con enfermedad renal activa utilizando un kit Biorad© 17-plex en una plataforma Luminex©. Los mediadores seleccionados incluyeron citoquinas Th1 (IL-2; IL-12p70); citoquinas Th2 (IL-4; IL-5; IL-10; IL-13); citoquinas Th17 (IL-6; IL-17); factores de crecimiento (GM-CSF; GCSF); quimiocinas (IL-8; MCP-1; MIP-1β), y también IL-7. Los pacientes con LES fueron seleccionados de la unidad de enfermedades autoinmunes de nuestro hospital. Como grupo control se seleccionó a 10 personas sanas que trabajan en la Universidad de Valladolid con semejante edad y sexo que el grupo de pacientes. La definición de paciente con LES fue que cumplieran los criterios de clasificación del Colegio Norteamericano de Reumatología para SLE5. Todos los pacientes con LES recibían terapia inmunomoduladora en el momento de la recogida de muestras, bien con fármacos antiinflamatorios no esteroideos, esteroides, cloroquina o inmunosupresores. La actividad de la enfermedad de cada paciente fue valorada en el momento de la recogida de muestra mediante el índice de actividad de enfermedad de LES 2000 (SLE Disease Activity Index 2000)6. La enfermedad renal fue definida como la presencia de proteinuria (>0,5g/24h), que es una característica predominante en la nefritis lúpica, la presencia de piuria (>6 leucocitos/campo), la presencia de cilindros urinarios por examen microscópico del sedimento urinario, la hematuria (>5 glóbulos rojos/campo), los niveles de creatinina en suero superiores a 1,1mg/dl en mujeres o superiores a 1,3mg/dl en hombres, y el aclaramiento de creatinina inferior a 87ml/min en mujeres o inferior a 97ml/min en hombres. El mejor método para evaluar la función renal es a partir de la estimación del filtrado glomerular (FG) con las fórmulas de Cockroft-Gault o MDRD. Los resultados del FG estimado se expresan de la siguiente manera: valores superiores a 60ml/min/1,73m2 son informados como FG superior a 60ml/min y en el caso de FG inferior o igual a 60ml/min/1,73m2 si se debe expresar con el valor numérico calculado a partir de la ecuación (Documento de Consenso de la Sociedad Española de Nefrología y la Sociedad Española de Bioquímica Clínica).

La muestra de la orina fue recogida en un tubo estéril apropiado de Eppendorf, y se congeló inmediatamente a −80°C hasta la evaluación de los mediadores inmunes. Los mediadores fueron analizados en la unidad de investigación de infección e inmunidad de nuestro hospital. La prueba de U Mann-Whitney fue utilizada para valorar el significado de las diferencias en los niveles de mediadores entre grupos. Las asociaciones entre niveles de mediadores, parámetros de laboratorio y niveles de severidad fueron estudiadas calculando los coeficientes de correlación de Spearman-Karber. El estudio fue aprobado por el Consejo de Revisión del Hospital Clínico Universitario de Valladolid, España. El consentimiento informado fue obtenido de todos los participantes del estudio.

Los resultados evidenciaron que los únicos mediadores perceptibles en la orina fueron IL-8, MCP-1 y MIP-1β. Cuando se compararon los niveles de estos mediadores en orina entre pacientes y controles, los niveles de MCP-1 fueron de forma estadísticamente significativa más altos que en los controles (resultados expresados como mediana [rango intercuartil]): pacientes (124,7 [138,6]pg/ml) y controles (56,8 [75,7]pg/ml) (p<0,05). Por el contrario, no se encontró ninguna diferencia entre pacientes y controles para IL-8 y MIP-1β. Es interesante el hallazgo de la correlación positiva entre los niveles de MCP-1 en orina con la puntuación del índice de actividad de enfermedad de LES 200013 de una manera significativa (se expresa como coeficiente de correlación de Spearman; p) (0,569; 0,004) y la correlación negativa con niveles de plasma de la proteína C4 del sistema del complemento (−0,389; 0,05). También es interesante el hallazgo de la asociación positiva entre los niveles en la orina de MCP-1 e IL-8 (0,436; 0,029) y entre MCP-1 y MIP-1β (0,478; 0,016), que señala de algún modo hacia una secreción coordinada de estas quimiocinas en esta enfermedad.

No se encontró relación de MCP-1 y la tasa de FG con la fórmula MDRD de los pacientes, siendo la media de 89,57ml/min/1,73m2.

Por consiguiente, nosotros examinamos simultáneamente por primera vez diecisiete mediadores inmunes en la orina de pacientes con la enfermedad renal en el contexto de LES.

Las quimiocinas, como son MCP-1 e IL-8, son potentes factores quimiotácticos de monocitos en el glomérulo cuando hay daño renal7–11, además, MCP-1 estimula el incremento de calcio intracelular, que induce la liberación de aniones superóxido, enzimas lisosomales y estimula la producción de moléculas de adhesión y citoquinas. Muchas citoquinas y mediadores proinflamatorios podrían provocar la producción de MCP-1 en las células mesangiales del glomérulo, las células endoteliales de túbulos y los monocitos. Se ha demostrado que los incrementos de la expresión tubular de MCP-1 fueron fuertemente asociados con infiltración de monocitos y fibrosis en el intersticio en pacientes con nefritis lúpica, sugiriendo que MCP-1 participa en la patogénesis del daño tubulointersticial, ya que recluta monocitos y se produce la fibrosis del intersticio.

Un método para detectar la expresión de MCP-1 en la enfermedad glomerular es midiendo los niveles de MCP-1 en orina, la cual se encuentra elevada en pacientes con glomerulopatías, y más acusadamente en pacientes que presentan glomerulopatías inflamatorias. Nuestros resultados refuerzan el papel de MCP-1 en la orina como biomarcador de actividad de enfermedad en el lupus renal, siendo la producción de MCP-1 mínima o indetectable en el tejido renal de sujetos sin afección renal, excluyendo la detección de otros mediadores inmunes solubles como citoquinas Th1, Th2, Th17 y factores de crecimiento como marcadores no invasivos.

Este trabajo ha sido posible gracias a una subvención «Caja de Burgos» («Premios de Investigación Biomédica»). Jesús F. Bermejo-Martin, R. Almansa y L. Rico fueron apoyados por el «Fondo de Investigaciones Sanitarias», el Ministerio de Ciencia e Innovación, España, EMER07/050 y el «Programa para favorecer la incorporación de grupos de investigación en las instituciones del Sistema Nacional de Salud, EMER07/050».

Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.